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Microscopie à Haut Contenu

Le criblage à haut contenu est une approche multi-paramétrique d’étude de la physiopathologie cellulaire à l’échelle de la cellule basée sur des technologies d’imagerie cellulaire.

Ce système repose sur l’acquisition automatique haute résolution et haute sensibilité en microscopie confocale ou plein champ de centaines de milliers de cellules suivie de l’analyse quantitative en flux des images de manière à tester, en un seul et même dosage, des milliers de conditions (extinction de gènes, molécules thérapeutiques, …) lors de cribles cellulaires structuraux et fonctionnels menés en parallèle. Cette approche permet ainsi une analyse à haut débit et haut contenu de gènes ou composées à vocation thérapeutique et la mise en évidence de leur impact sur la physiopathologie cellulaire dans le but d’identifier de nouvelles cibles ou molécules thérapeutiques.

Les systèmes HCS sont constitués de plusieurs composantes :

  • imagerie cellulaire : microscopie confocale ou plein champ, 2D ou 3D, cinétiques
  • automatisation de la préparation des échantillons (robots distributeurs de liquides, duplication de chimiothèque et RNAithèque, gestion et manipulation des plaques, …)
  • stockage, gestion et analyse des données : Columbus, Acapella, Harmony

La technologie HCS peut être utilisée dans un large spectre d’applications telles que :

  • l’identification de cibles par criblage fonctionnel par extinction de gènes à l’échelle du génome (banques de siRNA)
  • le criblage de banques de composés
  • le criblage secondaire et la caractérisation des composés actifs identifiés : identification de faux positifs, détermination des propriétés dose réponse, élucidation des mécanismes d’action,
  • la réalisation de tests d’innocuité in vitro des composés actifs identifiés
  • des études sur cellules souches : discrimination et analyse des différentes populations
  • la caractérisation de matériels biologiques
  • l’identification de biomarqueurs
  • des études diagnostiques
  • des analyses sur puces microfluidiques

Les criblages HCS s’appuient sur l’analyse en parallèle de multiples paramètres cellulaires structuraux et fonctionnels incluant :

  • morphologie cellulaire
  • réarrangements du cytosquelette
  • croissance neuritique
  • angiogenèse
  • gènes rapporteurs
  • expression de protéines
  • transduction du signal
  • activation de récepteur
  • distribution/adressage de protéines ou de micro-organismes dans différents compartiments cellulaires
  • flux calcique
  • distribution de molécule à vocation thérapeutique
  • phospholipidose
  • cytotoxicité
  • infection
  • apoptose
  • cycle cellulaire
  • prolifération cellulaire
  • différenciation cellulaire
  • adhésion cellulaire
  • migration cellulaire …

Le criblage à haut contenu peut être intégré à la recherche biomédicale dans divers domaines :

  • découverte de nouvelles molécules thérapeutiques
  • pharmacologie
  • maladies infectieuses
  • immunologie
  • maladies métaboliques
  • cancer
  • neurosciences
  • maladies cardiovasculaires
  • biologie du développement

Les ressources disponibles :

Système HCS automatisé en LNSB2

Système HCS automatisé en LNSB2

Afin de répondre aux besoins des criblages aussi bien de chimiothèque que de bibliothèques de siRNA, la plateforme robotique fournie par Agilent Technologies est constituée de
Un Appareil (...)

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Opera QEHS en LNSB3

Objectifs
10 x Air (UPLSAPO) 300 cellules, NA = 0.4, FOV = 860x690 µm², P = 6µm
20x Air (LUCPLFLN) 75 cellules, NA = 0.45, FOV = 430x345 µm², P = 6µm
20x Water (UAPO), NA = 0.7, P = 2µm
60x (...)

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